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        土壤酸性磷酸酶 (S-ACP) 活性檢測試劑盒說明書
        更新時間:2023-10-12 點擊量:424

        壤酸性磷酸酶 (S-ACP) 活性檢測試劑盒說明書

        量法

        :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定。

        規格100T/96S

        產品內容

        試劑一:液體 42mL×1 瓶,4℃避光保存。

        試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存。用前加 100mL 蒸餾水充分溶解。試劑三:液體 2.5mL×1 瓶,4 保存。

        試劑四:粉劑×1 支,4℃避光保存。臨用前加 576μL 無水乙醇 (自備) ,24 μL 蒸餾水充溶解。 (變褐色后不能再使用)

        準品:液體 1mL×1 支,0.5 μmol/mL 苯酚標準液,4℃保存。

        產品說明

        土壤酸酶是一類催化土壤有機磷礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉 化及其生物有效性,是評土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有 效磷量和 pH 顯著影響,根據最適 pH 范圍,通常分為酸性、中性和堿性三種類型。

        環境中,S-ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,通過測定酚的生成量即可計算  S-ACP 活性。

        試驗中所需的儀器和試劑:

        可見光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺式離心機、37℃恒溫培養箱、分析天平、 可調式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

        作步驟:

        、粗酶液提?。?/span>

        稱取風干混勻土壤約 0.1g ,加入 0.05mL 甲苯 (自備) ,輕搖 15min ;加 0.4 mL 試劑一并且搖勻

        后,置于 37溫培養箱,開始計時,催化反應 24h;到時后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻, 以終 止酶催化的反應。10000rpm 室溫離心 10min ,取上清液置于冰上待測。

        、測定步驟:

        a.  分光光度計/儀預熱 30 min 以上,調節波長到 660 nm ,蒸餾水調零。

        b.  空白管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 10 μL 蒸餾水,20 μL 試劑三,4 μL 試劑四,充分混勻, 顯色后再加蒸餾水 166μL ,混勻后室溫靜置 30 min ,于 660 nm 測定吸光度,記為 A 空白管。

        c.  標準管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 10 μL 標準液,20 μL 試劑三,4 μL 試劑四,充分混勻, 顯色后再加蒸餾水 166μL ,混勻后室溫靜置 30 min ,于 660 nm 測定吸光度,記為 A 標準管。

        d.  測定管:取微量玻璃比色皿/96 板,加入 10 μL 上清液,20 μL 試劑三,4 μL 試劑四,充分混勻, 顯色后再加蒸餾水 166μL ,混勻后室溫靜置 30 min ,于 660 nm 測定吸光度,記為 A 測定管。


        品僅供科學研究使用!請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途!


        :空白管和標準管只需要測定一次。

        三、S-ACP 活性計算:

        活性位定義:37℃中每克土壤每天釋放 1nmol 酚為 1 個酶活單位。

        S-ACP  ( nmol/d/g) = [C 標準液× (A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)]×V ÷W÷T =725×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管W

        C 標準液:0.5 μ mol/mL;  V 總:催化體系總體積,1.45mL;W :土壤樣品質量,g;T:催化反 應時間,24 h=1 d。

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